## 产品特点

尊龙凯时推出的这款检测试剂盒，依据探针法荧光定量PCR原理开发，具备以下显著特点：

1. **即开即用**：用户只需提供样品DNA模板，即可快速进行检测。

2. **高敏感性**：引物及各组分经过精心优化，灵敏度得到了显著提升。

3. **便于识别假阴性**：本产品提供阳性对照，便于用户区分假阴性样品，确保结果的准确性。

4. **高特异性**：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. **万能检测**：既可用于定性检测，也可用于定量检测，定量时线性范围至少达到五个数量级。

6. **丰富的检测次数**：产品支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应，极大地提高了实验的性价比。

7. **科研专用**：本产品仅限于科研使用，确保研究的专业性和准确性。

## 使用方法

### 一、DNA提取

使用用户自选的方法提取和纯化样品DNA，尤其本试剂盒兼容市场上大多数核酸提取试剂盒。

### 二、稀释标准曲线样品

为避免污染，请在独立区域进行阳性对照的稀释操作。

1. **标记管**：准备用于稀释的6个离心管，分别标记为7，6，5，4，3和2。

2. **加入DEPC-H2O**：每个管中加入45μL DEPC-H2O。

3. **初始稀释**：在7号管中加入5μL阳性对照（1×10E8拷贝/μL），震荡均匀，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。

4. **逐步稀释**：依次将阳性对照从7号管稀释至6号，5号管，直至得到每个无稀释标准曲线样品，所有样品置于冰上待用。

### 三、试剂配制

准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中添加相应的试剂成分，详见说明书。

### 四、添加模板

在每个qPCR管中加入2μL模板，依次为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和阳性对照，随后进行离心和扩增反应。

### 五、扩增反应

将PCR管放置于PCR扩增仪的样品槽，按照设定的扩增程序进行操作，具体细节请查看说明书。

### 六、结果分析

1. 制作标准曲线时，以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，反推待测样品的DNA浓度。

2. 如果未制作标准曲线，根据设定的标准判定检测结果：阳性对照的Ct值应<30，阴性对照的Ct值应为38或无Ct值，待测样品的结果可根据Ct值进行判定，其范围在35-38则需重复检测。

## 运输及保存

产品应在低温条件下运输，并储存于-20℃，有效期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。